體液免疫在建立和維持宿主-微生物群共生以及對(duì)病原微生物的免疫力中起著重要作用。然而，鑒定在屏障和全身組織內(nèi)引發(fā)適應(yīng)性免疫反應(yīng)的抗原是進(jìn)一步理解這種宿主-微生物對(duì)話的重大障礙。在這里，我們提供了一種方案，通過(guò)使用噬菌體（噬菌體）展示介導(dǎo)的抗體/抗原生物淘選來(lái)鑒定共生微生物和病原微生物表達(dá)的免疫原性蛋白抗原。該程序需要生成 M13 噬菌粒文庫(kù)，生產(chǎn) ORFeome（開放閱讀框總量）噬菌體文庫(kù)，然后進(jìn)行多輪基于親和力的免疫沉淀，隨后通過(guò) ELISA、ELISPOT 和/或 B 細(xì)胞四聚體生成進(jìn)行抗原驗(yàn)證。該方案經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可識(shí)別引發(fā) IgA 和 IgG 同種型反應(yīng)的抗原，并可以使用循環(huán)抗體或腸道抗體進(jìn)行抗原鑒定。編碼推定蛋白抗原的單克隆噬菌體的生成和分離能夠通過(guò) Sanger 測(cè)序輕松鑒定免疫原性抗原，通常提供攜帶表位區(qū)域的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域級(jí)分辨率。我們的方案可以由訓(xùn)練有素的分子生物學(xué)家執(zhí)行，并能夠在數(shù)周內(nèi)進(jìn)行抗原鑒定和驗(yàn)證。

原標(biāo)題：Identification of immunogenic commensal antigens using phage display
源于Nature Protocols (2025) 通訊作者：Samantha Kimmel & Oliver J. Harrison

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